抗体CMC生物中性蛋白酶(NP)检测试剂盒试剂组成介绍如下3 }- O& V _' A. c* v
中性蛋白酶(NP)检测试剂盒
* F$ k/ g4 J! J2 F0 m8 X# U! @ 测定意义：
6 Y# J3 [% E1 K, F5 I2 g# W; S NP在一定的温度和中性pH条件下，催化水解蛋白质。由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点，中性蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。) D x$ {: l3 g9 d. F
测定原理：
) X( m+ r4 [: }$ ?+ Z' S6 @+ x% o 中性条件下，NP催化酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。
) j) z, L# b/ r& `; B% E1 Z 自备仪器和用品：
' t; G1 q2 t. x! ]! ~ 可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、1.5 mL EP管和蒸馏水。
: U8 V3 W5 x- o+ n B 试剂一：液体90mL×1瓶，4℃保存。8 ?* p% B$ g& h& ?2 O; M1 h1 l. V
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加10 mL蒸馏水溶解。) X& h S2 f7 N6 Y% Q# k5 t
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入20 mL试剂一，沸水浴中磁力搅拌溶解。（可在烧杯上盖一层保鲜膜，注意观察，避免水分全部蒸发，一般加热15-30分钟，该试剂为过饱和试剂，充分混匀后仍出现颗粒物不溶物不影响使用）。/ {9 N6 {! `+ T, U( m/ {8 a1 A
试剂四：粉剂×1瓶， 4℃保存。临用前加50 mL蒸馏水溶解。- m8 U7 i6 L! Y+ \# _! M+ f
试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存。: r& m% q& z" u
标准品：液体1mL×1支，0.25 μ mol/mL标准酪氨酸溶液，4℃保存。8 Q: P/ M) U0 ?, W# [) ]
粗酶液提取：
+ |! w3 b! s* M. S; n 1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5——10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。
6 @; N" F7 V9 _7 B+ N: D 2.血清或培养液：直接测定。
/ e6 c# r# C n9 V1 { 3.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500——1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。; ?* p, {7 O( c# h u& {
注 意： 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
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