本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，fc效应与仪器分析技术相比，具有快速、简便、准确和灵敏度高等优点，操作时间为45min，能减少操作误差和工作强度。
- f2 c# l7 O; |) d& f+ t 试验原理:
% x8 A7 d* P% s' m- y& Q 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被四环素类药物抗原，样本残留的四环素类药物和微孔条上预包被的抗原竞争抗四环素类药物抗体（抗试剂），加入酶标二抗（酶标物），经TMB底物显色，样本吸光度值与其残留物四环素类药物呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中四环素类药物的含量。
' Y3 }) z- c8 x% ~9 }- }( o$ k 适用范围:) q- ~: h* O, q7 S5 K6 H+ P8 T
可定性、定量检测蜂蜜、牛奶中四环素、土霉素、金霉素、强力霉素等四环素类药物的含量。) y, Z8 P' D$ ]. e U( I* l) O
检测步骤:2 _& X. y) T0 }: C: |
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20——25°C）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。若试剂中有晶体析出，回温溶解后方可使用。) s }* \$ @) E- R/ g2 v
2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入锡箔袋，保存于2——8°C。切勿冷冻。
/ C* r0 u2 G9 P S$ ], R 3、洗涤工作液在使用前也需回温。
' b. T" L4 b; s# j2 C 4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。/ B w1 r( ~% n3 p! p' f
5、加标准品/样本：加标准品/样本100μL到对应的微孔中，再加入四环素类酶标物50μL/孔，再加入四环素类抗试剂50μL/孔轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25°C避光环境中反应30min。8 y3 O& P) o" v1 ?3 \$ x- B
6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液250μL/孔，充分洗涤4——5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
8 j1 t. F b+ |, D 7、显色：加入底物液A液50μL/孔，再加底物液B液50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25°C避光环境反应15min。
. k+ @ a8 {* K' ~ ^9 d 8、测定：加入终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。
: Z4 ?% l1 b* c* L X+ u 结果判定:
4 A' Z4 h: K9 u5 u: X7 G, l 请利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析（欢迎来电索取）。4 m+ E4 H- ]$ l. q
注意事项:- ?& P1 K) I2 ?4 W5 f
1、室温低于20°C或试剂及样本没有回到室温（20——25°C）会导致所有标准的OD值偏低。1 |+ B, e! T3 l! O; s8 g! l+ w
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
+ e: ~' ?' [ Q- h% a2 S 3、每加一种试剂前需将其摇匀。
/ o1 E$ J ?% G7 g 4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。5 D7 O1 |! Q+ v$ O9 h
5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
) s: h3 }& \) X4 A0 t 6、储存条件保存试剂盒于2——8°C，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进锡箔袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。7 \: ]& U2 ?+ `4 I
7、试剂变质的迹象发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。" o& { M; L, \& w! U" W. E
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20min，但不得超过20min。反之，则减短反应时间。
+ y7 q2 ^: V% I; w2 ~% k( H 9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，请加热溶解后使用。$ p8 n: c& R; q4 p) v. n, Q
10、该试剂盒最佳反应温度为25°C，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。) S6 r+ i2 }1 [
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