抗体药物研发公司显色是ELISA中的后一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。ELISA显色淡的原因及解决方案:
* h9 |" e: I8 M 原因一:试剂盒在运输途中时间太长,温度太高。
: r5 V: i+ h2 P; q. P& T! N 解决方案:尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温。+ _# i% b& X) X0 i: y( n
原因二:试剂盒未充分平衡。. ~+ v# m0 n7 u( {' T. G
解决方案:试剂盒从2——8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)。
; L6 k3 l3 h5 `: X4 I 原因三:培养箱温度不足37℃。- x: R8 g; ]% A% k
解决方案:注意培养箱温度,放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定,非隔水式培养箱尤其应注意。- A. f) Y- B6 q% P* G. E2 {
原因四:保温时间不足。& p( H0 h8 ?0 s+ C% t0 x9 S
解决方案:校正定时钟准确定时。
, H: a5 c/ c: K 原因五:洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加。
. f, ~6 s+ U, a, ~, @* r# f6 d 解决方案:按说明书要求保留洗涤时间,准确记住洗涤次数。7 S8 n/ J) P* D& b; O: }% V2 a |
原因六:移液器吸液量不足,吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁。
G# Z" P/ g; Q 解决方案:校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密,吸嘴内壁要清洁,一次性使用。" Z+ o; T5 ^5 m3 j8 @
原因七:蒸馏水水质有问题。
0 N! n# T& m" d+ E$ N7 i, n7 r 解决方案:使用新鲜合格的蒸馏。
7 p" A% ^' f: x- r, H: J 原因八:底物作用时间不足。
7 Y+ a4 K& B# C6 p! v, ^1 k/ H2 ]3 \ 解决方案:准确定时。
' E- C0 _( v" H 显色一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说,显色时间过短,结果偏低;显色时间过长,空白增高或者非特异性显色增加。
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