抗体药物研发公司显色是ELISA中的后一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。ELISA显色淡的原因及解决方案:
4 r1 J" X( _- ^* K7 a7 u. c 原因一:试剂盒在运输途中时间太长,温度太高。
! i# v. {5 j* `6 g, v4 X* e 解决方案:尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温。
! y( V6 L o" Z0 P" b' `4 O2 X 原因二:试剂盒未充分平衡。
! |# {7 `$ f6 F1 i: L 解决方案:试剂盒从2——8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)。
# O7 Z! _2 Z" o9 ^5 i 原因三:培养箱温度不足37℃。
. O$ {, i+ v `: X2 P 解决方案:注意培养箱温度,放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定,非隔水式培养箱尤其应注意。
; ?0 f! k* ?& G) Y 原因四:保温时间不足。$ S+ t8 G# s* L9 `
解决方案:校正定时钟准确定时。' E4 H |8 R! n+ Q# i7 a& }
原因五:洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加。
3 \; L' r4 o5 x 解决方案:按说明书要求保留洗涤时间,准确记住洗涤次数。
4 G) k9 {$ [# j$ J 原因六:移液器吸液量不足,吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁。) O6 V+ U; R, T1 O3 h A# \
解决方案:校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密,吸嘴内壁要清洁,一次性使用。! ?( @0 b3 m# R+ _0 k9 V8 n
原因七:蒸馏水水质有问题。$ f" v6 V, O; x8 w
解决方案:使用新鲜合格的蒸馏。
a; I4 G% ^- _$ k$ Y 原因八:底物作用时间不足。
) q7 N/ }' d2 _9 q/ C, A 解决方案:准确定时。
# R8 q( |+ X) B) | P& a1 _# o& { 显色一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说,显色时间过短,结果偏低;显色时间过长,空白增高或者非特异性显色增加。1 t* Q2 Z7 G& M
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