灌流细胞培养原代细胞是指从机体的组织（如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等）经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的 细胞，称为原代细胞。原代细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是种将细胞种保存下去的方法。同时也利培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
! D* L9 P- n) G: P1 z 一般认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细抱培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞疡变、细胞工程等问题的研究。
9 Y) O. @: v& K. b% v 那么关于原代细胞的传代培养，一般有以下两种方法，具体操作步骤：6 B9 n( s# b K6 @1 b
一、贴壁细胞的消化法传代0 V$ M. p7 w6 x9 V/ i Q8 c
1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。
$ [. R: b8 G# q 2、加入1ml左右消化液（胰蛋白鳄或与EDTA混合液）轻轻接动培养瓶，使瓶底细胞都浸入溶液中.: d V$ U; S& L/ g- D4 Q/ M
3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察，发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时，弃去消化液，加入培养液终止消化。( t2 V& c" Z* D) q, d( f: f
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中继续培养.第二天观察贴壁生长情况。7 {/ s7 i5 d* w' ^
二、悬浮细胞的传代% h- x$ R" Z* |1 [
1、直接传代
/ }& @" I# J* u5 ]' c2 k; _: z ①让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清吸掉1/2-2/3。- K5 y) _: X0 N R5 b9 k% u
②用吸管吹打形成细胞悬液后，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。$ C; Q6 ]( v8 r) @' O& _3 B$ T0 Q" |
2、离心法传代5 Q9 @, N; n% l* G( i5 J& d! o
①将细胞连同培养液一并转移到离心管内，离心800-1 OOOrpm, 5分钟。
+ {/ H p. l0 T3 J, c* V1 n4 D. l ②去除上清，加新的培养液到离心管内，用吸管吹打使之形成细胞悬液。9 m6 m, E2 L& F6 A) R
③将细胞悬液分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。
: o* m, [, y( l% |& y# B4 U8 |) V, |
|
