灌流细胞培养原代细胞是指从机体的组织（如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等）经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的 细胞，称为原代细胞。原代细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是种将细胞种保存下去的方法。同时也利培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
" h5 C7 e% q5 }, L/ W 一般认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细抱培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞疡变、细胞工程等问题的研究。7 ~ Y6 b2 [/ A8 H3 ~
那么关于原代细胞的传代培养，一般有以下两种方法，具体操作步骤：5 o3 E+ g& o1 |: }0 _( p
一、贴壁细胞的消化法传代
) b9 b/ k( [: h6 G 1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。: ]. W( a% B& I, d
2、加入1ml左右消化液（胰蛋白鳄或与EDTA混合液）轻轻接动培养瓶，使瓶底细胞都浸入溶液中.: H' p/ {3 g! {! ^# v) Y ^
3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察，发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时，弃去消化液，加入培养液终止消化。( `7 ~. d/ F+ ~: @- q# O6 ?
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中继续培养.第二天观察贴壁生长情况。
. B2 V& s1 }" l( l# u 二、悬浮细胞的传代# [8 L$ B9 @ \, s/ z) k
1、直接传代0 ^2 c5 T7 ~# F0 ^" [2 \
①让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清吸掉1/2-2/3。
# X! J. y/ k5 k- I; X6 J ②用吸管吹打形成细胞悬液后，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。: o( l1 _ O4 n% i7 \* Q
2、离心法传代/ u& @/ j' L5 Y4 t
①将细胞连同培养液一并转移到离心管内，离心800-1 OOOrpm, 5分钟。
- |2 D" S- X2 U' `, k ②去除上清，加新的培养液到离心管内，用吸管吹打使之形成细胞悬液。+ Q0 T' c0 U; ]
③将细胞悬液分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。; U5 A, M0 `3 r/ }0 `
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