实验原理; G% h: b7 s, H4 y0 D b( H7 _7 h' Z
mRNA生产工艺试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被植物生长激素释放肽（GHRP-GHrelin）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物生长激素释放肽（GHRP-GHrelin）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
7 k2 Q, @9 r4 k* c8 u9 ] ~+ Y 样本处理及要求
+ L1 E( L4 I, { 1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过一夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
5 B1 G& J6 o7 E% m) V% h 2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2 J4 ^% Y9 ?7 h 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。5 g9 J$ ~" k8 v- h5 H1 H7 C0 u% I8 |
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
- A( a$ V: a5 d8 \" j" A 注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
9 K2 j& u" Y& i; j1 W 需要而未提供的试剂和器材5 ^8 `2 d6 w1 z/ ? C) Z0 H
酶标仪（450nm）) n" b1 H/ O! r- {. c' M
高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
/ t; R0 Z1 \1 E c% \* @ 37℃恒温箱
+ v, F- g0 X( K6 H6 n7 E 蒸馏水或去离子水# E: z3 p) f( u9 G; P' ], o% @0 O! c
% j& c- W- p! v0 y i1 M |
