过表达细胞系构建人鼠疫抗体（Plague-Ab）ELISA检测试剂盒操作步骤

ningxueqin · 发表于 2024-02-20 11:28:24

　　过表达细胞系构建人鼠疫抗体（Plague-Ab）ELISA检测试剂盒操作步骤
　　1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
　　2.  设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；
　　3.  待测样本孔加待测样本50μL；
　　4.  随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗原100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
　　5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
　　6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
　　7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
　　结果判断
　　1.  试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；
　　阴性对照孔OD值平均值≤0.15。
　　2.  临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
　　3.  阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性
　　4.  阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性

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