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过表达细胞系构建人鼠疫抗体（Plague-Ab）ELISA检测试剂盒操作步骤4 t+ u, b/ b1 O7 H" j( G& _% |
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
1 ]6 i9 Z4 }; s 2. 设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；% _2 S8 ^9 k/ y" `! F( v
3. 待测样本孔加待测样本50μL；
& G; Y, d: @% Z* _# e9 m( C 4. 随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗原100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。, Z% K" w6 ]- i
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。9 n) s+ ^: O, i: l& O! x I
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
+ F z% ?* k* t. n- u Q: w i1 \ 7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
$ O0 q5 Z+ r$ o0 a, X 结果判断7 h9 {7 N7 `3 `+ ~
1. 试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；9 _: G# Z$ Z$ D. R& Z$ a# \- ?
阴性对照孔OD值平均值≤0.15。0 D8 {# G# y& b3 R5 ~$ Q
2. 临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
% n K8 \( R t3 r/ W% M! E4 j 3. 阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性
" }; o1 J, m% q 4. 阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性5 L6 h' Y3 S' {3 R9 Q
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