近期很多老师发图咨询细胞培养时背景的“颗粒”是不是污染，如何去除？今天这篇文章小编带大家全面解析细胞培养中出现的“颗粒”问题。细胞培养中常见的“颗粒”可分为胞内和胞外两种，下面两张图可以直观地向大家展示：% I% W7 a# Q/ j# w' s7 U) |
很多老师因为不清除这些“颗粒”的来源，害怕污染而将细胞丢弃，不仅浪费心力，还耽误实验进度，接下来我们逐步分析这些“颗粒”产生的原因。6 A: p5 S( D& c! U6 @# e
1、细菌或真菌污染
5 u# A/ U: w, }* ~, @% U 双特异性抗体平台真菌污染相对来说比较好鉴别，一般肉眼可见培养基上层漂浮的霉斑或显微镜下可见菌体，细菌的菌体相对较小，显微镜下呈棒状、球状或者杆状，由于细菌增值产生酸性物质，短期内培养基变黄，浑浊，细沙状沉淀。! O: h! V0 {' T/ j! R( Q
2、细胞碎片4 q- `3 k) B. W3 O Y5 e1 B
消化不当或者PH、渗透压、温度的变动可能引起细胞死亡，产生碎片，如何对细菌和细胞碎片辨别？有困难的老师，可以登录爱必信官网-产品资讯处或者关注爱必信公众号查看往期文章。
2 W1 }- u! F) o" s 3、凋亡小体
1 F7 I8 S6 n" Q4 Z3 c: `% T) n B1 e 程序性死亡细胞的核DNA在核小体连接处断裂成核小体片段，形成浓缩的染色质块。随着染色质不断聚集，核膜在核孔处断裂，形成核碎片。同时由于不断脱水，细胞质不断浓缩，细胞体积减小。整个细胞通过发芽、起泡等方式形成一个球形的突起，并在其根部绞窄而脱落形成一些大小不等，内含胞质、细胞器及核碎片的小体称为凋亡小体。
+ h" z9 W* A. @7 K* ~$ E 4、支原体集落
6 S( o$ i' ?7 b/ B9 Y, y! q 支原体无细胞壁，直径为0.1-0.3μm，且形态易变，极易通过除菌过滤器，单个的支原体无法显微镜观察，目前已知的主要污染源是动物血清、胰酶和已污染培养物的气溶胶。来源广泛、不易过滤、难以观察，给细胞培养带来了极大隐患。单个的支原体无法从显微镜下观察，支原体集落却可以被捕捉到。; }6 B1 [7 j* i, E0 u# @( ~
5、黑胶虫2 g3 ^6 S# g; h7 d% U6 T5 F- z
谈到黑胶虫，大家应该都对他神秘的“身世”有印象，目前多数黑胶虫被鉴定为细菌，黑胶虫最明显的特征是运动，但是这里小编要提醒大家，支原体集落，可能也会出现运动的现象，详细的讲述可以查看往期文章。+ B! _) q) T9 N( V8 K# i
视频 颤动的黑胶虫
s1 b d0 f7 r$ L4 J 6、血清中的物质 w( z: |- y: ]" P7 \7 ?
血清反复冻融或者经过灭活后，可能会产生“小黑点”，此外不要认为会增多的一定是微生物污染，血清质量不好，影响细胞生长，衰老细胞增多形成细胞碎片，也会呈现细胞长势不佳，黑点增多的现象。
D9 m9 R6 @! b 经过分析，许多老师肯定又觉得混乱，细胞培养遇到“颗粒”到底如何应对？( d, o) u/ m2 W( N- V
首先，如果是微生物污染，不重要或者可替代的细胞，我们都建议丢弃，并排查污染来源，被污染的试剂也要丢弃，并且对使用的仪器和环境进行除菌，比较重要的细胞，可以用含抗生素的缓冲液清洗过后，使用含较高浓度双抗或三抗培养，尝试消除，对于支原体和黑胶虫污染，使用相应的支原体清除剂和黑胶虫清除剂进行处理。
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其他情况我们建议优先排查血清质量，特别是更换血清批次的，选择质量好的血清也是细胞培养成功与否的关键所在，除非实验特殊要求，其他情况下，不建议对血清进行灭活处理。而细胞正常凋亡产生的碎片，可以低俗离心分离完整细胞和细胞碎片，参考条件为300-500rpm 3min，根据实际情况进行调整，可以用缓冲液清洗几次。' \+ u/ i3 x; T( y% M) X
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