生物药研发生产平台elisa试剂盒操作步骤：
( {( {: a% d/ a. ?4 z9 r+ l: s （1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。8 }7 G2 S% ?0 x% T B
（2）酶标板置4℃，包被过夜。" x; P2 U9 y5 d+ v! f+ h) j7 U
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。3 y7 ^3 @3 c" x4 U+ w3 [ [
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。$ ^, x# g, c* T
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
7 K" O( a" k4 s+ p& j5 u （6）洗板，同（4）。
6 f" x$ k9 D# `2 O （7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。; O/ T; L) n6 x. D2 C9 M: u
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
1 F) t- l1 p9 B# i9 D （9）洗板，同（4）。/ S4 w5 J* H9 [ D/ u
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。
1 L' x6 s5 N, Z1 I; B P2 D （11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
% m& R3 G- x4 k, D （12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
, J8 T3 x0 `; o: S) {( w1 a （13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。. N& C2 u( u* v T
人elisa试剂盒注意事项：
( ]- y" Q* q, f8 v. V 1．边缘效应 使用96孔板的ELISA测定中，常发现有“边缘效应"，即外周孔显色较中心孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应"，并且可提高测定的重复性。4 f" w+ n. W! c7 o% R
2．加样在现在的ELISA商品试剂盒中，必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。
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