生物药物研发服务测定原理:
# _( @, H8 l# {! _ 鸟氨酸和α-酮戊二酸在鸟氨酸转氨酶和NADH作用下发生氨基转移反应生成吡咯啉-5-羧酸（P5C），同时产生NAD，通过检测340nm处的吸光度的变化可反映出鸟氨酸转氨酶活性的高低。
7 t+ W1 V* U$ L 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。/ E4 M% S6 C: \, t9 X6 e5 E2 c
测定操作:* P9 U! Q* A, k( v
1. 酶标仪预热30min，调节波长至340nm。
& D5 J0 n( m2 H6 Z6 F% n9 J 2. 将配好的试剂二、三、四37℃预热5min。（注意：粉剂试剂需要自行配制）" }% b5 s& o n
3. 取96孔板，依次加入60μL试剂二，60μL试剂三，60μL试剂四，20μL粗酶液，充分混匀，记录340nm处初始吸光值和37℃反应10min的吸光值A2，△A=A1-A2。: e- u3 c2 Z& `( P5 O
4. 计算公式
) l6 v/ j2 Q) k" F W# u 用96孔板测定的计算公式如下+ X5 z" `9 W0 T% C- L: U( t
（1）按照样本蛋白浓度计算
& _' c7 M$ F$ S; \( r& R$ W" J# S 酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。8 A0 f$ J7 @5 ~0 P; D: @
δ-OAT（nmol/min /mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T
4 B: @2 |& X6 ^4 y =321.54×ΔA÷Cpr; e2 c# Q/ r, @
（2）按照样本质量计算! d, O/ k# v! _; q
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
# p* E b2 j( w$ Z$ |" W: z) f δ-OAT（nmol/min /g 鲜重）=ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T) Q7 ~% J8 g4 D: A$ e
=321.54×ΔA÷W
( i3 b1 Y* O$ \' i5 @ （3）按照细胞数量计算
1 N @1 P; }/ P+ J# |4 z+ y( l 酶活单位定义：每104个细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。# v& b; N7 e0 T5 Q2 b$ R* Q; r4 g
δ-OAT（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总) ÷T, r" v0 e5 x) Y; N
=321.54×ΔA÷细胞数量' F6 O( Z& X; i$ K! D3 E
（4）按照液体体积计算
; A' M4 J- g. _, }, ?. d5 k% p7 o 酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
D, O' r( P: y* b2 ~# W8 ]: K0 q δ-OAT（nmol/min /mL）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷V样÷T% c9 J/ T9 D& E, o4 J
=321.54×ΔA
8 ^+ R$ X. [' \ c- ] V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g; j, \7 y* }" Z) I$ B
测定意义:
( i0 I" c0 k: o0 z D1 Y: g 脯氨酸是植物体内适应逆境胁迫的一种重要的渗透调节物质。高等植物中脯氨酸代谢因其初始底物不同，分为谷氨酸( Glu) 和鸟氨酸( Orn) 两条合成途径。鸟氨酸转氨酶( δ-OAT) 是 是以鸟氨酸为前体合成脯氨酸途径的关键酶，对植物适应逆境胁迫起关键作用。
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