首先我们得明白免疫组化是什么？mRNA生产免疫组化是指应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技(immunocytochemistry)。今天小编为大家整理了一些一些免疫组化的常见问题，下面我们来看看吧！' w O! J) }* N6 Q' `
1.在什么情况下使用TritonX-100？+ i1 w. P+ d/ r; u, X. ~
(1)Triton X-100 化学名称为聚乙二醇辛基苯基醚，是一种去污剂。在免疫组织化学(>10um 厚切片)和免疫细胞化学中一般用Triton X-100作为细胞通透剂，在膜上打孔。7 R( S0 G( j1 k* C0 a* Q# r
(2)其作用原理：Triton X-100可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内，故在细胞免疫组化时尤为推荐使用，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。
8 d4 Q1 n6 q" U9 ?" _* A2 t (3)Triton X-100既是一种表面活性剂，也有抗氧化作用0 a/ V p: l+ M$ J* e: u# C. T
2.封闭血清的选择原则是什么？
5 o+ y3 s( n$ W; A (1)膜上或切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性！(2)封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物( T" d) A+ J2 x5 O$ @
自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景。
% }" |* p; F0 l" Z1 K; W- G (3)也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能与一抗来源一致。" n- U6 \1 f$ [- a# @. m# u
3.抗体孵育条件的比较？
6 Z" a$ b, p. }( c (1)一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果→佳；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般 37 度 1-2 h，而4度夜和从冰箱拿出后 37 度复温 45 min。/ S5 F: E! E8 ?, \! N
(2)二抗一般室温或 37 度 30 min-1 h，具体时间需要摸索。
3 e: Z- W$ S { L' E" @1 g* L 4.一抗 4 度孵育后为什么要进行 37 度复温？
J/ K3 n: E$ d9 F R( { (1)一方面，防止切片从 4 度直接放入 PBS 易脱片；
+ {9 o1 J. j$ R (2)另一方面，使抗原抗体结合更稳定。一般不需要, 但对表达较弱的抗原可能有用,4 度和 37 度时分子运动方式不同, 前者分子碰撞机率和运动速度小于后者, 后者结合更快, 但敏感性也提高了并易造成非特异染色。
$ C6 r) n, O9 K/ V2 q) d# e (3)其实，我更赞同后一种说法，因为我尝试把肝脏片子从 4 度夜拿出后，直接用 PBS 洗没发生过脱片现象。事实胜于雄辩！ |
