常见实验中，IND申报细胞爬片实验是科研人员比较头疼的问题，因为它会存在很多你意想不到的却又十分重要的问题。以下就是实验室常见的也是学生经常提到的细胞爬片的问题解答，给大家做这方面实验的一个参考意见，避免大家在实验过程中缺乏经验而走弯路。
) X$ p1 L- v0 c) _/ z' [ elisa试剂盒解析1. 细胞爬片可以用含叠氮钠PBS液保存，但不知道具体浓度，请告知。8 d; D4 ~, a. l5 a% o
答：加在液体中作为防腐剂的叠氮钠浓度一般为0.04–0.08%。但是我建议对于细胞爬片，还是尽量快的进行处理，以防不必要的问题！
' u- E4 h% b% z/ z! _1 e$ ~: L elisa试剂盒解析2. 我的细胞爬片经过4%多聚甲醛固定，PBS冲洗后直接就放在了-20度，还能用于免疫组化吗？！
* [7 K" U( j! n 答：应该没有问题，但是还是现作先染好些，以防抗原的丢失
$ O0 f3 T4 u& ^ 3. mRNA原位杂交经4%多聚甲醛固定,固定液需加DEPC水。其它建议用甲醇固定。——20度保存。3 L6 i1 |, J X% I) Y: z: N
4. 如果是4%多聚甲醛固定，然后放在PBS中保存，在4度冰箱里保存两周没问题。时间再长就没试过了。
) [# \/ \$ e3 r 5. 丙酮中固定5-10分钟，然后风干，放置4度保存过夜应该是没有问题。不要固定过夜，蛋白质固定过度，会影响抗原的暴露，影响免疫组化结果。如果是胞浆 或胞核抗原出现假阴性结果，可考虑应用0.5%的triton-100孵育30分钟，渗透细胞膜。如果玻片没有经过特殊处理，不要用其他抗原修复的方法， 会造成掉片，我曾有过这方面的体会。
\( X1 e! l2 U* u 6. 丙酮固定后，PBS洗涤3次，即可保存至4度冰箱备用。
2 F2 N6 o& Y: [" K) ]" } elisa试剂盒解析7. （1）细胞爬片先用TBS洗3次，每次5分钟
' l0 B# h9 ?- S0 W （2）4%多聚甲醛固定，室温，20分钟
( U2 Y: v' y. ?$ h t3 |' d9 G （3）70%-80%-90%-95%-100%梯度酒精脱水，通风橱内干燥，-80度保存。2周没有问题的，我保存过2个月都有信号，不过还是保存时间短一点的好。
9 z5 |( o3 ?9 k 8. 我的心肌细胞爬片用不同浓度的乙醇依次脱水后,就放在室温中,因为是要拍电镜,但是学校电镜坏了,呵呵,所以放了一个月后去拍,还是很好。
7 N. p$ E0 W0 N 9. 细胞爬片用4%多聚甲醛或冷丙酮等固定，用PBS冲洗后，晾干，放在-20度保存一个月没有问题的。
o5 M' A+ V1 }7 i: r 10. 细胞爬片，有机溶剂如4%多聚甲醛或冷丙酮等固定后，轻轻摇动玻片或培养皿等，静置2 min左右，弃去固定液，不用PBS洗而是采用空气干燥，干燥后的标本可于-70℃长期保存。解冻时要小心抗原破坏，应先将标本转移于干冰预冷的固定液， 然后再将混合液转移至室温下，固定液到达室温时取出标本，再用PBS冲洗，在做以后的步骤。
) b1 f' C3 [% b& c) |4 Z( w2 y% e 11. 我也做过细胞爬片的组化染色，不过没有遇到类似的问题。细胞培养好后用PBS洗一遍，然后4%多聚甲醛4度固定15分钟，自然风干。室温保存几周内都可 以用的。我想这可能与抗原的类型有关，有的对氧化等损伤比较敏感，有的差一些。避光保存在4度，同时尽量隔绝空气。免疫荧光与普通DAB显色差别只再 二抗的标记，样品的保存应该是没有多大差别的。
% g8 t; k0 @' U$ N 12. 细胞爬片丙酮固定后-20度保存，现在要再做免疫荧光，将保存的爬片拿出37度复温然后常规操作就可以了。' Y7 d- Q2 {5 A `
13. 爬片做免疫组化的优势在于抗原新鲜，细胞形态保存较好。若爬片需长期保存并出现你这样的问题，原因可能是：1）试验步骤有误，建议重复并加阳性对照片。 2）加一抗前处理同石蜡切片，可进行抗原修复，如胰酶消化或热修复。3）因为抗原抗体反应在液相中进行，故对已极度干燥的爬片充分水化很重要。建议试验前 用PBS浸泡过夜。如不能解决你的问题请：。本人在湖南省肿瘤医院病理科（长沙市）做免疫组化。
+ Z/ t0 y' N* ?& W 14. 4%多聚甲醛或冷丙酮固定都可以，也有用*的，固定好后放-20度，2-3个月是没有问题的。) k9 Q. A2 A: ], T( X3 q+ P4 s7 O
- L8 A% S; W4 f$ s9 S# ~/ h( e8 g |
