ELISA检测结果准确可靠需要品质好的试剂，良好的仪器和正确的操作。0 X& x- X3 b$ T1 _' S
病毒生产公司通常我们可用于ELISA检测的样本是有多种类型的，如血清、血浆、尿液、细胞培养上清或组织匀浆液等，不同类型的检测样本前期的处理方法是不一样的。正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性的第一步。
* o! T& j; U! [ 不同类型的样本的处理方法：9 g) ^* K- K' r2 ~1 t3 q; `( |2 J
1.血清
6 @7 K* ]* _$ F/ @ u; [ X 血清是常用于ELISA检测的一类样本，处理也比较简单。
0 |* x8 g% x/ ?) N, U3 T3 { 用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本，将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜，使血清析出。（最好将试管或离心管倾斜放置，使液面横截面增大，能使血清更大程度的析出。）4℃1000×g离心20min，仔细收集上清。建议将血清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。" s% q/ b& O0 X+ r3 b
采血过程中应避免溶血，因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质，在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色，而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染，因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。- {8 D7 i/ C" O
2.血浆6 d: m$ L4 I2 d7 X& U8 x0 h/ g: _
用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本，标本采集后30min内4℃1000×g离心15min，取上清即血浆。将上清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。
2 X4 y8 C8 O7 ^8 b' C* B+ C& Z 常用的抗凝剂为EDTA等，检测时还应仔细阅读试剂盒说明书，检查试剂盒是否对抗凝剂有特殊要求。4 E' e ?. f z
3.细胞培养上清% e3 s" ~' c& X$ \/ I, k
取细胞培养上清到离心管，1000×g离心20min，除去细胞碎片及杂质，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
% C# Z; b: E! [# w8 m 4.组织匀浆液
# I) ~4 s: l7 f# r; g9 x. S 1) 将组织样本用PBS (0.01M, PH 7.4) 冲洗，洗去组织表面残留的血液或杂质。) D/ D. E8 W4 p: P6 a4 n
2) 将组织块称重，记录后剪碎，碎块应尽量小，便于匀浆得更充分。
4 }) j1 p% f; I: Z( i8 a 3) 将组织按一定的比例加入预冷的PBS（临用前加入蛋白酶抑制剂）匀浆，匀浆时置于冰上或冰浴中。（通常按组织重量：PBS体积=1:9的比例匀浆，例如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数）。
6 u7 \$ S& Z. W6 l 4) 吸取匀浆液到离心管，4℃5000×g 离心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
3 z5 C H4 I& A L4 {8 P 尿液、唾液等其他液体生物样本
4 A# \& D$ k- r5 _( Y 1000×g离心20min，取上清即可检测。$ y" |8 W* d: b& {) f0 ]* C7 G
总的来说，因为ELISA只能检测可溶性蛋白的含量，所以应保证所有样本均为澄清的液体，沉淀或悬浮物都应离心去除。- N% w, p* J: t% ~5 T5 c% ]
为了保证检测的准确性，保存于-20℃或-80℃的样本最好在1~6个月内检测；4℃保存的样本应在1周内进行检测。另外，还应保证样本不含NaN3，因为NaN3会抑制HRP的活性，从而导致假阴性的结果。3 H. t, [" Y( N* F, i: J# e- ]$ P
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