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细胞培养使用血清应注意哪些问题?抗体药物研发流程图

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ningxueqin 发表于 2023-06-16 23:03:07 | 显示全部楼层 |阅读模式
  血清的质量,抗体药物研发流程图种类及使用的浓度都有可能影响细胞的生长,而不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同,尤其是对克隆 细胞的生长,某些批次血清可能含有毒性或抑制细胞生长的物质。  C4 P) b" D* f4 p
  注意以下几点:
' Z/ b8 @1 F& U  (1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃或-80℃低温冰箱 中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1 个月。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱 前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
4 y: q. M5 t3 e; ^& y% D) f5 H  (2)Cyagen提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。否则会导致营养物质的流失!4 @; N6 M9 p; O# @
  (3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20 ℃或 -80 ℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室温,待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20 ℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。影响使用效果!# B$ ?0 m- G, e. n$ I8 U9 ~+ f7 }3 k( D
  (4)热灭活是指56℃, 30 分钟加热已*解冻的血清。加热过程中須規則搖晃均勻。此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement )灭活。除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。Cyagen提供的血清是经过严格处理可以直接使用,不需要特殊的处理,就能够维持良好的支持效果。
& d5 h7 q" q1 N1 g( i2 K# N  (5)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破坏而影响血清质量。1 M- c1 O) {3 C7 L" _; E* _
  (6)血清中的沉淀物! b) j$ q7 `" X. f$ o" h
  絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5 分钟去除,也可不用处理。显微镜下“小黑点”:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”,常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长。/ A+ N" `3 P' }8 r7 K2 B2 }
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danlan1234 发表于 2026-04-02 18:36:54 | 显示全部楼层
说得很实在,没有夸大其词,这种真实分享太难得了
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