细胞培养基的配制2 y: U. }* s2 v( l: b
细胞培养 液中添加的血清有牛血清、马血清、人血清等，其中牛血清是zui常用的血清，分为胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是从母牛破腹取出的胎牛中分离出的血清，价格昂贵。新生小牛血清是从刚出生的尚未哺乳的小牛中分离出来的血清，如厂家能做到这一点，新生小牛血清的质量与胎牛血清的质量相差不大。如小牛出生后已哺乳，稳定细胞系构建服务从这种小牛中取出的血清中可能含有较多的生物活性物质，其质量明显不如前两种。( H% g* f9 _5 n/ o& j' _, z
血清的质量，种类及使用的浓度都有可能影响细胞的生长，而不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同，尤其是对克隆 细胞的生长，某些批次血清可能含有毒性或抑制细胞生长的物质。注意以下几点：
. ?) A% p1 c! q8 @ (1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃或-80℃低温冰箱 中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1 个月。由于血清结冰时体积会增加约10%，因此，血清在冻入低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。) O! a9 V2 K2 O# v% p
(2)Cyagen提供的血清为无菌，无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物，则可将血清加入培养液内一起过滤，切勿直接过滤血清。否则会导致营养物质的流失!
6 p0 }. U7 J! x$ R4 S* n8 J (3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法：-20 ℃或 -80 ℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室温，待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20 ℃进入37℃解冻，这样因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。影响使用效果!
" t, o3 q* a% w$ y; F0 A- M% Y: ` (4)热灭活是指56℃, 30 分钟加热已*解冻的血清。加热过程中須規則搖晃均勻。此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement )灭活。除非必须，一般不建议作此热处理，因为热处理会造成血清沉淀物显著增多，而且还会影响血清的质量。补体参与反应有：细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。Cyagen提供的血清是经过严格处理可以直接使用，不需要特殊的处理，就能够维持良好的支持效果。3 F+ F" W! ~9 X- P$ `$ [! C% z
(5)切勿将血清在37℃放置太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中的有效成分会破坏而影响血清质量。! U6 Q$ b2 Z' J4 p! E N
(6)血清中的沉淀物* I$ P7 o: P) D; J* A1 s ^3 }
絮状物：主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成，这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5 分钟去除，也可不用处理。显微镜下“小黑点"：经过热处理过的血清，沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点"，常误认为血清受污染。一般情况下，此小黑点不会影响细胞生长。
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