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抗体药物研发流程图常温细胞应该如何处理呢?
2 q9 Z' F9 Z4 k- |: V# I% V7 o 1. 首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。2 K2 q) { {/ \" O
2. 用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量丛瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖,将细胞置于细胞培养箱内趋置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。+ i9 D- w7 T! o+ y7 t( o
3. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
6 |2 ? r3 Y7 m4 |) L9 d3 A9 i/ K- w 4. 静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态;建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。$ y& P/ g- S& x; z4 r. g2 p/ `
5. 贴壁细胞:若细胞生长密度超过80%，可正常传代;若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基,预留5m左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作,瓶盖可稍微拧松。9 X; O0 W" ?6 K
6. 悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离 心5min,离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5m培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养,补加培养基至5ml;若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养,直至细胞密，度达80%左右时再进行传代操作。
! D" }/ y# h# Q; m 温馨提醒:
5 @4 M/ n2 x" ^% y; S! Q' @ 可将培养瓶内多余的培养基转移至50ml无菌离心管中备用;细胞*传代时，可以将该培养基按照一定比例和客自备的培养基混合使用，让细胞逐渐适应培养条件。确认细胞状态良好后，应及时将部分细胞冻存，再进行后续的实验，避免后期实验失误可能发生细胞污染或死亡而导致的细胞丢失，影响后续实验。5 ~! x! Z& @$ E+ ?- R
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