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ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。该法适于测定细胞培养上清、血清、血浆及组织液中的样本,干扰小可以测到每毫升纳克水平的细胞因子(或受体)的水平。生产抗体的公司在这种测定方法中有3种必要的试剂:
6 `- z& i7 ^+ j5 v2 ^ ①固相的抗原或抗体。1 g0 }7 u, \& U# Z! f7 g1 X" `" k6 u
②酶科记的抗原或抗体。
+ B! F4 v: \, v; V% l# ` ③酶作用的底物。
" L' n O8 W! A7 R, ? 根据ELISA试剂盒的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。
4 t7 a8 d2 e% E9 q2 d$ n (一)双抗体夹心法。
# X. E! g& g! Q% f8 D( X (二)双位点一步法。9 X7 O" D+ c* ?* Q
(三)间接法测抗体。
$ J: u! U! }7 }+ d& b, b/ ? (四)竞争法。! n; t2 y/ |: t$ _
(五)捕获法测IgM抗体。
$ Q" P# G( x0 O# \4 @ (六)应用亲和素和生物素。
7 {. Q# o. ^: [- x: a) h* N- x ELISA试剂盒普遍用作非放射性同位素的成键化验. 在这种方法中, 通常标准配体是固定的, 通过加入溶液相受体或蛋白质来使之成键. 通过加入与受体特异性反应的抗体来定量成键的受体, 而且抗体的量以加入第二种能显色的抗体测量. 第二种抗体能识别抗体的末端, 在其末端的碱性磷酸酯或过氧化物酶等与酶发生反应, 从而使溶液显色。) g i; j5 k$ ?) w
操作注意事项+ [. C; B0 f, O2 h1 M
1.ELISA试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。4 U; a( i9 U! W3 p
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
4 c1 J* S" H, }! l# C* D& i' Z 3.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
+ A) }% Q, U8 e% h U 4.所有液体组分使用前充分摇匀。
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