ELISA试剂盒规范曲线的制作关键简述全人源化单克隆抗体

heshao · 发表于 2023-03-22 19:47:28

　　很多试剂检查都涉及到规范曲线的疑问，ELISA试剂盒规范曲线做的好与坏会直接影响到试验的成果，乃至关系到试验的成败，那么究竟怎么绘制或制造规范曲线呢？
　　一、做规范曲线样品检查时有几个疑问需要注意
　　1、样品的浓度等目标是依据规范曲线计算出来的，所以首先要把做规范曲线看作是比做正式试验还要主要的一件事，不然后边的试验成果无从谈起。
　　2、全人源化单克隆抗体设置规范曲线样品的规范浓度规模要有一个对比大的跨度，而且要能包括你所要检查试验样品的浓度，即样品的浓度要在规范曲线浓度规模以内，人ELISA试剂盒包括上限和下限。而对于呈S型的规范曲线，尽量要使试验样品的浓度在中心斜度最陡段，即曲线简直成直线的规模内。
　　3、选用倍比稀释法制造规范曲线中的规范样品浓度，这么就能够确保规范样品的浓度不会出现较大的违背。
　　4、检查规范样品时，应按浓度递加顺序进行，以削减高浓度对低浓度的影响。
　　5、规范曲线的样品数通常为7个点，但最少要确保有5个点。
　　6、做出的规范曲线相数因试验要求不一样而有所变化，但通常来说，相数R最少要大于0.98，对于有些试验，最少要0.99乃至是0.999.
　　二、ELISA试剂盒挑选啥方程去拟合
　　在S曲线的低浓度部分能够用乘幂方程极好的拟合，中低浓度部分能够用直线方程，中心部分可用对数方程，而中后段可用四参数。免疫检查时标准点（能够是倍比稀释的，也能够不是）浓度假设和相应的吸光度（OD）值假设能够出现直线当然是最抱负的了，这时能够经过EXELL等利便的取得拟合曲线，进而推算出样品的浓度值。
　　对于标准曲线的拟合办法，直线、二次曲线、三次曲线、指数、对数等虽都可用于ELISA及其它生物学反响中的曲线拟合，但都只合用于曲线的一部分，有的合用于前半段，有的合用于后半段，有的合用于中心一段，而Logistic曲线则对曲线的悉数都有较好的合用性。在一个长的区间内，Logistic应当都能拟合得较为抱负。假设用来定量，S形曲线的中心段（较陡处）是对比好的，而两真个平整部分计算误差会大，有时乃至会很大。用于免疫检查的所谓“标准曲线”真实称为拟合曲线对比适宜。现在国际上最盛行的免疫检查拟合办法是“四参数逻辑拟合”，用这种拟合办法通常能够对比的反映浓度和吸光度的曲线，从而进一步对比的取得样品中待测物质的浓度值。但咱们做免疫检查很少有时候能够有这么抱负的情况，标品浓度和相应OD值通常是"S"型的曲线，这时就不能用直线拟合的办法了，而对拟合办法进行挑选即是必要的了。
　　枢纽在于你的标准曲线做到了S形的哪一部分，你想检查的样品浓度在曲线的哪一部分。当然，假设用于定量，仍是在中心一段较好。但建模型是一回事，而用它来定量是另一回事。这些办法当然没有一种办法能够通用，但也都能够用。但并不是说它即是的。事实上不仅是ELISA，其它良多生物学反响都是S形曲线，也都能够用Logistic曲线拟合。

codyness · 发表于 2026-04-04 02:50:26

蹲了这么久，终于看到有价值的讨论，支持一下！

回忆快乐 · 发表于 2026-06-01 17:16:13

内容很干货，没有多余的废话，值得反复看

北上广深 · 发表于 2026-08-23 20:34:33

学习到了，之前一直没注意过这个点，受教了

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