抗体CMC生物中性蛋白酶(NP)检测试剂盒试剂组成介绍如下' ?5 t7 o+ Q* t" x+ I0 G
中性蛋白酶(NP)检测试剂盒- X, u4 p% y1 R' W4 q$ _
测定意义:
1 S, X9 T7 `. @6 O& L" Z1 `. W- N NP在一定的温度和中性pH条件下,催化水解蛋白质。由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点,中性蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。% {" b" r3 |; j1 _4 I
测定原理:) A, o0 _3 W5 P4 }5 i2 n1 J0 \
中性条件下,NP催化酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm有特征吸收峰。
/ L( \ Z1 l+ d4 } 自备仪器和用品:
+ J6 t' \9 x& K5 k$ y 可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、1.5 mL EP管和蒸馏水。
% V6 q" I. t4 J8 ~- D9 ?( A 试剂一:液体90mL×1瓶,4℃保存。
- l6 i1 b- c' g- E7 [" e 试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加10 mL蒸馏水溶解。
* V. L$ c' D2 E$ W- d 试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加入20 mL试剂一,沸水浴中磁力搅拌溶解。(可在烧杯上盖一层保鲜膜,注意观察,避免水分全部蒸发,一般加热15-30分钟,该试剂为过饱和试剂,充分混匀后仍出现颗粒物不溶物不影响使用)。0 p4 S/ G1 N7 [+ v7 |9 R8 g. U% A
试剂四:粉剂×1瓶, 4℃保存。临用前加50 mL蒸馏水溶解。
3 S0 R p) X( X4 i* o 试剂五:液体10mL×1瓶,4℃保存。
9 S: J2 C) @* o2 M4 B 标准品:液体1mL×1支,0.25 μ mol/mL标准酪氨酸溶液,4℃保存。
. E' F. X& k& K 粗酶液提取:" y \" i d9 I. v! T, S$ w
1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5——10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即粗酶液。# |, q, h$ X/ z& l8 ]
2.血清或培养液:直接测定。
$ X& v9 b" {( l1 x' a/ ` 3.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500——1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
; c/ }5 i% A$ K9 n/ h5 Q: W2 \! J 注 意: 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
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