抗体药物研发公司显色是ELISA中的后一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。ELISA显色淡的原因及解决方案:
% I9 N$ e, I$ \% t" I) j5 m+ v" F 原因一:试剂盒在运输途中时间太长,温度太高。# Q% m$ H, T3 q# q$ W
解决方案:尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温。
6 [) q) d ?6 |# e& H# L0 F 原因二:试剂盒未充分平衡。3 Q( D+ `, R+ R' Y7 w
解决方案:试剂盒从2——8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)。) {2 w8 z! s7 ~* ^- i3 x
原因三:培养箱温度不足37℃。& Z: O7 u0 t* s
解决方案:注意培养箱温度,放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定,非隔水式培养箱尤其应注意。& j! @& `) ?' r
原因四:保温时间不足。: n" W, E5 I, u. C, k
解决方案:校正定时钟准确定时。
" u1 M, {( ~' E0 D# x, _( [ 原因五:洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加。$ S$ Y3 f* c' G8 D" s" W& ]8 v$ y$ X
解决方案:按说明书要求保留洗涤时间,准确记住洗涤次数。
9 J$ K- ]* E6 |0 O( [ 原因六:移液器吸液量不足,吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁。
% M" u* j& F$ o* ]* S 解决方案:校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密,吸嘴内壁要清洁,一次性使用。* E$ X9 n& w9 S; W, f" Q
原因七:蒸馏水水质有问题。) v) h$ J: N$ j& B2 p7 R1 C
解决方案:使用新鲜合格的蒸馏。) O/ G* g2 s% |4 d& k
原因八:底物作用时间不足。
4 h/ b, H- G- }9 y! ^0 c3 ] 解决方案:准确定时。
, ?! `- O+ E: M" ]* J 显色一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说,显色时间过短,结果偏低;显色时间过长,空白增高或者非特异性显色增加。9 s9 p9 c m6 _( R1 N D
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