抗体药物研发公司显色是ELISA中的后一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。ELISA显色淡的原因及解决方案:$ C* V8 C* V, C
原因一:试剂盒在运输途中时间太长,温度太高。, K1 N# I5 l1 W. W
解决方案:尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温。
& N! w' D! Z4 i 原因二:试剂盒未充分平衡。
+ ?# Q4 X j% @2 i0 T( Z 解决方案:试剂盒从2——8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)。
1 w; c$ y$ G: w) N 原因三:培养箱温度不足37℃。
4 h$ i1 j3 d* u# n, f: V 解决方案:注意培养箱温度,放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定,非隔水式培养箱尤其应注意。
" g% n* }. H1 {4 H9 O s 原因四:保温时间不足。3 t! j, N) ], T
解决方案:校正定时钟准确定时。) o3 l, E# { D0 p' `$ i( Q# O* c
原因五:洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加。2 @5 |/ Y9 F6 r+ X0 j
解决方案:按说明书要求保留洗涤时间,准确记住洗涤次数。( k- z4 T4 x* v2 Y
原因六:移液器吸液量不足,吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁。
' D' R7 K3 A# ^ 解决方案:校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密,吸嘴内壁要清洁,一次性使用。% F4 L* t9 O0 x6 ~. m- S
原因七:蒸馏水水质有问题。4 i7 W1 x; B: |5 ]" Y3 S
解决方案:使用新鲜合格的蒸馏。
/ s- h4 i/ ~. M0 L 原因八:底物作用时间不足。
8 y S+ `/ B& l+ b1 ^ 解决方案:准确定时。) q# Y9 o/ j4 u/ c
显色一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说,显色时间过短,结果偏低;显色时间过长,空白增高或者非特异性显色增加。5 _, k3 r# Q% R c6 W! g8 J6 J
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