抗体药物研发公司显色是ELISA中的后一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。ELISA显色淡的原因及解决方案:) l# ]: B8 m. d( I5 k4 t
原因一:试剂盒在运输途中时间太长,温度太高。
; y {$ D. I: U2 \. l0 @ 解决方案:尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温。" a" }, ^0 W+ A% U
原因二:试剂盒未充分平衡。
% d4 v/ b% K' g: r3 J' u! X 解决方案:试剂盒从2——8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)。
2 S2 v' a4 K* e 原因三:培养箱温度不足37℃。0 L8 l+ ^ F3 i4 Y/ ^
解决方案:注意培养箱温度,放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定,非隔水式培养箱尤其应注意。
2 H& O- p0 H& W$ w* @! d 原因四:保温时间不足。
: v! v: F( |9 l# I# ? 解决方案:校正定时钟准确定时。1 }" i% [: M8 \2 b* J
原因五:洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加。
5 o* t: N' `# z8 Y% S8 \, d 解决方案:按说明书要求保留洗涤时间,准确记住洗涤次数。' A8 e# Y" m5 M6 C( [
原因六:移液器吸液量不足,吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁。" h* v1 d4 j: |7 h& E& z
解决方案:校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密,吸嘴内壁要清洁,一次性使用。8 r* v8 H0 a4 ?* m8 [5 M
原因七:蒸馏水水质有问题。
8 v9 @. a$ e# M1 C 解决方案:使用新鲜合格的蒸馏。+ D$ K3 h0 N$ X) T4 g
原因八:底物作用时间不足。- C, L' o0 n8 W+ t9 R" E, F
解决方案:准确定时。
2 [: i4 d0 C, A$ ] f( J 显色一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说,显色时间过短,结果偏低;显色时间过长,空白增高或者非特异性显色增加。
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