灌流细胞培养原代细胞是指从机体的组织（如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等）经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的 细胞，称为原代细胞。原代细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是种将细胞种保存下去的方法。同时也利培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
4 v F5 H+ L O- ?& u 一般认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细抱培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞疡变、细胞工程等问题的研究。
+ R2 ^1 N ~$ u j' d6 z* i 那么关于原代细胞的传代培养，一般有以下两种方法，具体操作步骤：. e0 v/ j; c3 z( U
一、贴壁细胞的消化法传代# M1 a" u1 C N
1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。+ ]3 h* H7 x5 p$ {/ }
2、加入1ml左右消化液（胰蛋白鳄或与EDTA混合液）轻轻接动培养瓶，使瓶底细胞都浸入溶液中.0 A0 ~% g% e, C( t" V+ D
3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察，发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时，弃去消化液，加入培养液终止消化。" P8 n! U) o) }1 Q6 c' m
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中继续培养.第二天观察贴壁生长情况。
. C" d8 f$ u2 z6 j9 [ 二、悬浮细胞的传代0 f/ Q, G' u9 D8 j# m
1、直接传代3 C, G: | Z m3 Z( T1 f( T& q, H4 p
①让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清吸掉1/2-2/3。7 I' p* |! M A; d, _) Y7 |
②用吸管吹打形成细胞悬液后，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。! t$ }" x- h) Y% W3 d
2、离心法传代6 Q1 d9 @7 i$ E
①将细胞连同培养液一并转移到离心管内，离心800-1 OOOrpm, 5分钟。
' v+ u: ?6 U5 k; m3 Y ②去除上清，加新的培养液到离心管内，用吸管吹打使之形成细胞悬液。9 I5 @# B3 U0 W. l2 X5 T9 ?
③将细胞悬液分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。
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