灌流细胞培养原代细胞是指从机体的组织（如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等）经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的 细胞，称为原代细胞。原代细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是种将细胞种保存下去的方法。同时也利培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
1 ~& r$ @' g- X 一般认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细抱培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞疡变、细胞工程等问题的研究。
' Y' U6 h3 C* P# x- H 那么关于原代细胞的传代培养，一般有以下两种方法，具体操作步骤：
. q+ w( C# G3 K. ?! P: @- I 一、贴壁细胞的消化法传代: \3 D S9 T+ W5 |0 W- B/ X
1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。1 w/ ` I6 _% }3 v4 w- ]: E( z
2、加入1ml左右消化液（胰蛋白鳄或与EDTA混合液）轻轻接动培养瓶，使瓶底细胞都浸入溶液中.: O4 ^$ [/ e, L) q$ x% I
3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察，发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时，弃去消化液，加入培养液终止消化。# V% F. e, U5 [& p
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中继续培养.第二天观察贴壁生长情况。
* j. G4 g. L$ M6 N8 I9 M/ B, ` 二、悬浮细胞的传代
7 ]+ g) s* p: r( U( R- h 1、直接传代
( x6 y! k1 g9 }& b8 b4 T ①让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清吸掉1/2-2/3。
9 \. `8 a A. b( E0 n% G' U3 X ②用吸管吹打形成细胞悬液后，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。1 O, }1 P: _8 }: l$ [4 z
2、离心法传代% D6 P; C$ d9 |8 ?$ f6 t: D
①将细胞连同培养液一并转移到离心管内，离心800-1 OOOrpm, 5分钟。# {: r# T7 l0 }1 h
②去除上清，加新的培养液到离心管内，用吸管吹打使之形成细胞悬液。! A# }5 l0 D# h% Z E9 V
③将细胞悬液分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。
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