BsAb在ELISA试剂盒实验中，偶尔会遇到样品浓度挨近试剂盒的灵敏度就容易发生样本OD450值低于空白值的现象，特别是在血清和血浆样本中。这就有可能是基质效应导致的结果。& u( n. B2 n$ L7 ]2 x
1 E$ R& W8 n; M6 g3 H 什么是基质效应呢？% A' ?; s( w* L
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首先我们要知道什么是基质，基质是指样品中目标分析物以外的部分。由于基质成分会对分析过程有显著干扰，影响分析结果的准确性。业内把这些影响统称为基质效应。这是ELISA试剂盒开发和使用中需要避开的雷。: b9 \# H' T1 W) p% w0 N
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如何判断ELISA试剂盒是否是基质效应呢？ : c7 j. Q* T4 k9 ^! W1 e 5 x p. B; k9 p& c0 w# r 当单个样本或少量样本值低于空白值时，可能是实验操作出现问题，这时应增加重复，进步操作技术。当许多样本都低于空白值时，应思考基质效应的影响，建立校正曲线予以修改。基质效应的原因错综复杂，有可能是样品中存在的基质导致原抗体的联络结合能力下降，便产生了样本值低于空白值的现象。导致样本值无法计算出数值，或许数值为负。- U. o3 [& @, [# S
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虽然原因复杂，但有方法可以用来评估基质效应。, H6 d' o$ }) Q/ D
6 N' W! A5 i$ G' I4 U2 r6 ] 第一种方法是采用线性稀释，一般来讲，抗原和捕获抗体、检测抗体之间的结合作用很强，样品浓度被稀释并不影响它们的结合，而造成基质效应的非特异结合的力要弱很多，如果不断稀释样品，非特异结合造成的干扰会逐步减少，测量值也更接近真实值。没有基质效应时，无论如何稀释，测量值都和真实值吻合。而有基质效应时，稀释会造成非特异性结合比例的减少，测量值也相应地产生很大改变。+ F+ Q6 L% _' q7 O u
& h# l5 M0 d q$ @0 q8 q5 n5 ^ 第二种方法是掺入回收率实验，将低、中和高浓度的分析物掺入到已测定过浓度的样本中，掺入前后实测到的浓度增加部分与掺入浓度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈现。回收率介于80-120%，才符合标准。/ D5 @" \, @' C8 S! K
