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BsAb如何判断ELISA试剂盒是否是基质效应呢?

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heshao 发表于 2024-04-13 16:24:52 | 显示全部楼层 |阅读模式
  BsAb在ELISA试剂盒实验中,偶尔会遇到样品浓度挨近试剂盒的灵敏度就容易发生样本OD450值低于空白值的现象,特别是在血清和血浆样本中。这就有可能是基质效应导致的结果。& N6 }; [5 \+ E+ ~2 m
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  什么是基质效应呢?
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  首先我们要知道什么是基质,基质是指样品中目标分析物以外的部分。由于基质成分会对分析过程有显著干扰,影响分析结果的准确性。业内把这些影响统称为基质效应。这是ELISA试剂盒开发和使用中需要避开的雷。
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+ k" }/ J0 T+ r* ?  如何判断ELISA试剂盒是否是基质效应呢?9 P: p' `( f3 d7 K& f% Y

' X9 n7 T* l) h- Y3 p' O- d3 [2 \  当单个样本或少量样本值低于空白值时,可能是实验操作出现问题,这时应增加重复,进步操作技术。当许多样本都低于空白值时,应思考基质效应的影响,建立校正曲线予以修改。基质效应的原因错综复杂,有可能是样品中存在的基质导致原抗体的联络结合能力下降,便产生了样本值低于空白值的现象。导致样本值无法计算出数值,或许数值为负。3 c% r9 I% J6 Q9 ~# `) D

/ B. R+ O1 A' c  虽然原因复杂,但有方法可以用来评估基质效应。
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6 _. N3 H2 U2 o5 ]8 p" \2 Z  第一种方法是采用线性稀释,一般来讲,抗原和捕获抗体、检测抗体之间的结合作用很强,样品浓度被稀释并不影响它们的结合,而造成基质效应的非特异结合的力要弱很多,如果不断稀释样品,非特异结合造成的干扰会逐步减少,测量值也更接近真实值。没有基质效应时,无论如何稀释,测量值都和真实值吻合。而有基质效应时,稀释会造成非特异性结合比例的减少,测量值也相应地产生很大改变。
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  第二种方法是掺入回收率实验,将低、中和高浓度的分析物掺入到已测定过浓度的样本中,掺入前后实测到的浓度增加部分与掺入浓度之比就是回收率,回收率以百分比的形式呈现。回收率介于80-120%,才符合标准。, M; J, r. W- _; j

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